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<!DOCTYPE html>

<title>In-vitro-Transkription</title>

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<h1 id="firstHeading" class="firstHeading mw-first-heading">In-vitro-Transkription</h1>

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</div>

<div id="mw-content-text" class="mw-body-content mw-content-ltr" lang="de" dir="ltr"><div class="mw-content-ltr mw-parser-output" lang="de" dir="ltr">Die In-vitro-Transkription, also die <a href="DNA" class="mw-redirect" title="DNA">DNA</a>-abhängige Synthese von <a href="RNA" class="mw-redirect" title="RNA">RNA</a> im Reagenzglas, ist eine <a href="Molekularbiologie" title="Molekularbiologie">molekularbiologische</a> Methode zur Erzeugung von RNA und zur Untersuchung von <a href="Promotor_(Genetik)" title="Promotor (Genetik)">Promotoren</a> und ihrer <a href="Genexpressionsanalyse" title="Genexpressionsanalyse">Aktivierung</a> durch <a href="Transkriptionsfaktor" title="Transkriptionsfaktor">Transkriptionsfaktoren</a>.

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Die_Synthese_von_RNA">Die Synthese von RNA</h2></div>

<a href="In_vitro" title="In vitro">In vitro</a> erzeugte RNA dient dem Studium der <a href="Strukturaufkl%C3%A4rung" title="Strukturaufklärung">RNA-Faltung</a> und RNA-Stabilität, der Herstellung von <a href="Gensonde" title="Gensonde">Sonden</a>, sowie als Template (<a href="Matrize_(Genetik)" title="Matrize (Genetik)">Matrize</a>, <a href="Englische_Sprache" title="Englische Sprache">engl</a>. template) für die <a href="Zellfreie_Genexpression" title="Zellfreie Genexpression">In-vitro</a><a href="Zellfreie_Genexpression" title="Zellfreie Genexpression">-Translation</a> und die <a href="Translation_(Biologie)" title="Translation (Biologie)">Translation</a> in Zellen.

Die grundlegende Arbeit stammt aus dem Labor von <a href="Douglas_A._Melton" title="Douglas A. Melton">Douglas A. Melton</a>.<a href="#cite_note-KriegMelton1984-1">[1]</a> Er konnte zeigen, dass man mit einem <a href="Vektor_(Gentechnik)" title="Vektor (Gentechnik)">Plasmidvektor</a>, der einen Promotor des <a href="Bakteriophagen" title="Bakteriophagen">Bakteriophagen</a> SP6 gefolgt von einem <a href="Offener_Leserahmen" title="Offener Leserahmen">offenen Leserahmen</a> (<a href="Englische_Sprache" title="Englische Sprache">engl</a>. open reading frame, ORF) aufweist, der SP6-<a href="RNA-Polymerasen" title="RNA-Polymerasen">RNA-Polymerase</a> und vier <a href="Ribonukleotide" title="Ribonukleotide">Ribonukleotiden</a> große Mengen an RNA herstellen kann. In der Folge wurde das System mit den Promotoren der Bakteriophagen T3 und T7 erweitert.<a href="#cite_note-PMID1985921-2">[2]</a> Dabei erwies sich die Synthese mit der T7-RNA-Polymerase als besonders effizient.

Eine wichtige Anwendung ist die Herstellung von <a href="Molek%C3%BClmarkierung" title="Molekülmarkierung">markierten</a> RNA-Sonden, <a href="Gensonde" title="Gensonde">Gensonden</a>, die auch Ribosonden (engl. riboprobe) genannt werden. In diesem Fall werden Transkripte mit <a href="Radioaktivit%C3%A4t" title="Radioaktivität">radioaktiv</a>- (32P, 35S) oder <a href="Fluoreszenz" title="Fluoreszenz">fluoreszenzmarkierten</a> Ribonukleotiden synthetisiert. Alternativ wird die Transkription zum indirekten Nachweis u. a. mit Nukleotiden durchgeführt, die mit <a href="Biotin" title="Biotin">Biotin</a> oder <a href="Digoxigenin" title="Digoxigenin">Digoxigenin</a> modifiziert wurden.

Zu diesen Zwecken werden mit der <a href="Polymerase-Kettenreaktion" title="Polymerase-Kettenreaktion">Polymerase-Kettenreaktion</a> (PCR) erzeugte DNA-Templates in geeignete <a href="Vektor_(Gentechnik)" title="Vektor (Gentechnik)">Plasmidvektoren</a>, wie pGEM (<a href="Promega" title="Promega">Promega</a>) oder pET (Novagen) <a href="Klonierung" title="Klonierung">kloniert</a>, die flankierend zur <a href="Polylinker" title="Polylinker">multiplen Klonierungstelle</a> Promotoren der <a href="Bakteriophage" class="mw-redirect" title="Bakteriophage">Bakteriophagen</a> SP6, T3 oder T7 aufweisen. Anschließend wird das Plasmid am <a href="Nukleins%C3%A4ure-Nomenklatur" title="Nukleinsäure-Nomenklatur">3‘-Ende</a> mit einem <a href="Restriktionsenzym" title="Restriktionsenzym">Restriktionsenzym</a> linearisiert und mit der entsprechenden RNA-Polymerase, z. B. <a href="T7-RNA-Polymerase" title="T7-RNA-Polymerase">T7-RNA-Polymerase</a>, und den geeigneten Ribonukleotiden zur Erzeugung von Run-off-Transkripten inkubiert. Auf diese Weise lassen sich sense- und antisense-Proben erzeugen.<a href="#cite_note-MeltonKrieg1984-3">[3]</a> Die markierten Sonden werden in <a href="Biochemie" title="Biochemie">biochemischen</a> Nachweisverfahren, wie z. B der <a href="In-situ-Hybridisierung" title="In-situ-Hybridisierung">In-situ-Hybridisierung</a> eingesetzt. Alternativ zur <a href="Klonierung" title="Klonierung">Klonierung</a> lassen sich auch PCR-Fragmente direkt einsetzen, wenn einer der eingesetzten <a href="Primer" title="Primer">Primer</a> einen Phagenpromotor enthält. Diese Möglichkeit ist wichtig für die <a href="Hybridisierung_(Molekularbiologie)" title="Hybridisierung (Molekularbiologie)">Hybridisierung</a> von <a href="DNA-Microarray" class="mw-redirect" title="DNA-Microarray">DNA-Microarrays</a>. Die T7-RNA Polymerase findet auch Anwendung, um <a href="Single_Guide_RNA" title="Single Guide RNA">Single Guide RNAs</a> (sgRNA) für das <a href="CRISPR/Cas-Methode" title="CRISPR/Cas-Methode">CRISPR/Cas System</a> zu erzeugen.

Eine weitere wichtige Anwendung ist die Generierung von <a href="MRNA" title="MRNA">mRNAs</a> die als Template der Translation dienen. Hierzu werden <a href="CDNA" title="CDNA">cDNAs</a> oder <a href="Molekularbiologie" title="Molekularbiologie">molekularbiologisch</a> generierte offene Leserahmen in einen geeigneten <a href="Vektor_(Gentechnik)" title="Vektor (Gentechnik)">Vektor</a> kloniert. Die mRNA Synthese erfolgt in Anwesenheit eines <a href="5%E2%80%B2-Cap-Struktur" title="5′-Cap-Struktur">Capping</a> Substrates, das von der T7-RNA-Polymerase effizient eingebaut wird.<a href="#cite_note-PMID3526287-4">[4]</a> Für die Anwendung in zellulären Systemen werden Konstrukte verwendet, bei denen auf das <a href="Stopcodon" title="Stopcodon">Stopcodon</a> noch ein <a href="Polyadenylierung" title="Polyadenylierung">PolyA-Tail</a> folgt. Die <a href="In_vitro" title="In vitro">in vitro</a> <a href="Proteinbiosynthese" title="Proteinbiosynthese">Proteinbiosynthese</a> wird häufig als gekoppelte Transkription/Translation durchgeführt. Alternativ wird die mRNA gereinigt und als Template für die Translation in geeigneten <a href="Lyse_(Biologie)" title="Lyse (Biologie)">Lysaten</a> oder <a href="Extraktion_(Verfahrenstechnik)" class="mw-redirect" title="Extraktion (Verfahrenstechnik)">Extrakten</a> etwa aus <a href="Weizen" title="Weizen">Weizenkeimen</a> oder <a href="Retikulozyten" class="mw-redirect" title="Retikulozyten">Retikulozyten</a> von Kaninchen erzeugt.

Unter den zellulären Systemen spielen <a href="Eizelle" title="Eizelle">Froschoozyten</a> eine herausragende Rolle, da sie besonders für <a href="Elektrophysiologie" title="Elektrophysiologie">elektrophysiologische</a> Untersuchung der untersuchten Genprodukte geeignet sind.<a href="#cite_note-PMID18998089-5">[5]</a>

In vitro transkribierte mRNA ist seit einigen Jahren auch im Fokus der <a href="Pharmakologie" title="Pharmakologie">pharmakologischen</a> Forschung als eine neue Klasse unter den Arzneimitteln.<a href="#cite_note-PMID25233993-6">[6]</a> Die RNA kann fehlende oder fehlerhafte genetische Information ersetzen, ohne dass ein <a href="Viraler_Vektor" title="Viraler Vektor">viraler Vektor</a> Verwendung findet. Um eine höhere Stabilität zu erzeugen, wird hier häufig <a href="N1-Methylpseudouridin" title="N1-Methylpseudouridin">N1-Methylpseudouridin</a> (m1Ψ) anstelle von <a href="Uridin" title="Uridin">Uridin</a> eingesetzt und damit eine <a href="Nukleosid-modifizierte_mRNA" title="Nukleosid-modifizierte mRNA">Nukleosid-modifizierte mRNA</a> erzeugt. Besondere Bedeutung kommt den mittels T7-RNA-Polymerase erzeugten <a href="RNA-Impfstoff" title="RNA-Impfstoff">Vakzinen</a> zu. Hier ist insbesondere die mRNA für eine modifizierte Form des <a href="SARS-CoV-2" title="SARS-CoV-2">SARS-CoV-2</a> <a href="Peplomer" title="Peplomer">Spike</a>-<a href="Membranst%C3%A4ndiges_Protein" title="Membranständiges Protein">Proteins</a> von Bedeutung, die u. a. Grundlage des <a href="SARS-CoV-2-Impfstoff" class="mw-redirect" title="SARS-CoV-2-Impfstoff">SARS-CoV-2-Impfstoffes</a> <a href="BNT162b2" class="mw-redirect" title="BNT162b2">BNT162b2</a> ist.

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Untersuchung_von_Promotoren">Untersuchung von Promotoren</h2></div>

Die In-vitro-Untersuchung von Promotoren klonierter Gene in Extrakten und Proteinfraktionen erlaubt sowohl Rückschlüsse auf die beteiligten DNA-Elemente als auch auf die an der Transkription beteiligten Proteine.<a href="#cite_note-DignamMartin1983-7">[7]</a>

Die eukaryontischen RNA-Polymerasen benötigen für die Initiation und Elongation zusätzliche Proteine, die basalen <a href="Transkriptionsfaktor" title="Transkriptionsfaktor">Transkriptionsfaktoren</a> und die spezifischen Aktivatoren und Repressoren. Der amerikanische Molekularbiologe <a href="Robert_G._Roeder" title="Robert G. Roeder">Robert G. Roeder</a> hat mit In-vitro-Transkriptionsassays maßgeblich zum Verständnis der Regulation der Genaktivität beigetragen.<a href="#cite_note-Roeder2005-8">[8]</a><a href="#cite_note-DignamLebovitz1983-9">[9]</a>

Für ein typisches Experiment benötigt man die DNA-Matrize, einen Promotor und die zu transkribierende Region, eventuell mit stromaufwärtsgelegenen regulatorischen Elementen, wie <a href="Enhancer_(Genetik)" title="Enhancer (Genetik)">Enhancer</a> und <a href="Silencer" title="Silencer">Silencer</a>, einen <a href="Proteinreinigung" title="Proteinreinigung">Zellextrakt</a>, der alle für die Transkription notwendigen Proteine enthält, die vier Ribonukleotide und einen geeigneten <a href="Puffer_(Chemie)" title="Puffer (Chemie)">Puffer</a> mit den notwendigen Ionen. Möchte man die cis-Elemente untersuchen, mutiert oder deletiert man regulatorische Bereiche, möchte man trans-Elemente Untersuchen, setzt man Proteinfraktionen ein, denen bestimmte Proteine fehlen. Entsprechend kann man auch den Einfluss <a href="Rekombinantes_Protein" title="Rekombinantes Protein">rekombinanter Proteine</a> durch deren Zugabe untersuchen.

Die Transkription wird in der Regel durch Einbau radioaktiver Nukleotide, meistens [α-32P]-<a href="Uridintriphosphat" title="Uridintriphosphat">UTP</a> nachgewiesen. Es werden entweder linearisierte, oder G-freie Templates eingesetzt. Im ersten Fall entstehen Run-off-Transkripte, während im zweiten Fall ein Template eingesetzt wird, das in Transkriptionsrichtung einen Abschnitt ohne Guaninreste aufweist. Anstelle von <a href="Guanosintriphosphat" title="Guanosintriphosphat">GTP</a> wird 3‘-O-Methyl-GTP eingesetzt, dessen Einbau zu einem Strangabbruch führt.<a href="#cite_note-WangSawadogo1998-10">[10]</a>

Die Transkripte werden nach einer <a href="Polyacrylamid-Gelelektrophorese" title="Polyacrylamid-Gelelektrophorese">Polyacrylamid-Gelelektrophorese</a> durch eine <a href="Autoradiographie" title="Autoradiographie">Autoradiographie</a> nachgewiesen. Durch Messung der Radioaktivität der spezifischen Gelbande im <a href="Szintillationsz%C3%A4hler" title="Szintillationszähler">Szintillationszähler</a> oder mittels <a href="R%C3%B6ntgenspeicherfolie" title="Röntgenspeicherfolie">Röntgenspeicherfolie</a> und Phosphorimager lässt sich die transkriptionelle Aktivität bestimmen.

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Literatur">Literatur</h2></div>

<ul><li><a href="Friedrich_Lottspeich" title="Friedrich Lottspeich">Friedrich Lottspeich</a>, Joachim W. Engels (Hrsg.): Bioanalytik. 2. Auflage. Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg 2006, ISBN 3-8274-1520-9.</li></ul>

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Einzelnachweise">Einzelnachweise</h2></div>

<li id="cite_note-KriegMelton1984-1"><a href="#cite_ref-KriegMelton1984_1-0">↑</a> P. A. Krieg, D. A. Melton: <cite style="font-style:italic">Functional messenger RNAs are produced by SP6 in vitro transcription of cloned cDNAs</cite>. In: <cite style="font-style:italic">Nucleic Acids Research</cite>. Band 12, Nr. 18, 1984, <a href="Internationale_Standardnummer_f%C3%BCr_fortlaufende_Sammelwerke" title="Internationale Standardnummer für fortlaufende Sammelwerke">ISSN</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="https://zdb-katalog.de/list.xhtml?t=iss%3D%220305-1048%22&key=cql">0305-1048</a>, S. 7057–7070, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1093/nar%2F12.18.7057">10.1093/nar/12.18.7057</a>.<span class="Z3988" title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rfr_id=info:sid/de.wikipedia.org:In-vitro-Transkription&rft.atitle=Functional+messenger+RNAs+are+produced+by+SP6+in+vitro+transcription+of+cloned+cDNAs&rft.au=P.+A.+Krieg%2C+D.+A.+Melton&rft.date=1984&rft.doi=10.1093%2Fnar%2F12.18.7057&rft.genre=journal&rft.issn=0305-1048&rft.issue=18&rft.jtitle=Nucleic+Acids+Research&rft.pages=7057-7070&rft.volume=12" style="display:none">

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<li id="cite_note-PMID1985921-2"><a href="#cite_ref-PMID1985921_2-0">↑</a> E. D. Jorgensen, R. K. Durbin, S. S. Risman, W. T. McAllister: Specific contacts between the bacteriophage T3, T7, and SP6 RNA polymerases and their promoters. In: <a href="Journal_of_Biological_Chemistry" title="Journal of Biological Chemistry">Journal of Biological Chemistry</a>. Band 266, Nummer 1, Januar 1991, S. 645–651, <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1985921?dopt=Abstract">PMID 1985921</a>.

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<li id="cite_note-MeltonKrieg1984-3"><a href="#cite_ref-MeltonKrieg1984_3-0">↑</a> D. A. Melton, P. A. Krieg, M. R. Rebagliati, T. Maniatis, K. Zinn, M. R. Green: <cite style="font-style:italic">Efficientin vitro synthesis of biologically active RNA and RNA hybridization probes from plasmids containing a bacteriophage SP6 promoter</cite>. In: <cite style="font-style:italic">Nucleic Acids Research</cite>. Band 12, Nr. 18, 1984, <a href="Internationale_Standardnummer_f%C3%BCr_fortlaufende_Sammelwerke" title="Internationale Standardnummer für fortlaufende Sammelwerke">ISSN</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="https://zdb-katalog.de/list.xhtml?t=iss%3D%220305-1048%22&key=cql">0305-1048</a>, S. 7035–7056, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1093/nar%2F12.18.7035">10.1093/nar/12.18.7035</a>.<span class="Z3988" title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rfr_id=info:sid/de.wikipedia.org:In-vitro-Transkription&rft.atitle=Efficientin+vitro+synthesis+of+biologically+active+RNA+and+RNA+hybridization+probes+from+plasmids+containing+a+bacteriophage+SP6+promoter&rft.au=D.+A.+Melton%2C+P.+A.+Krieg%2C+M.+R.+Rebagliati%2C+...&rft.date=1984&rft.doi=10.1093%2Fnar%2F12.18.7035&rft.genre=journal&rft.issn=0305-1048&rft.issue=18&rft.jtitle=Nucleic+Acids+Research&rft.pages=7035-7056&rft.volume=12" style="display:none">

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<li id="cite_note-PMID3526287-4"><a href="#cite_ref-PMID3526287_4-0">↑</a> D. A. Nielsen, D. J. Shapiro: Preparation of capped RNA transcripts using T7 RNA polymerase. In: Nucleic acids research. Band 14, Nummer 14, Juli 1986, S. 5936, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1093/nar%2F14.14.5936">10.1093/nar/14.14.5936</a>, <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3526287?dopt=Abstract">PMID 3526287</a>, <a rel="nofollow" class="external text" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC311604/">PMC 311604</a> (freier Volltext).

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<li id="cite_note-PMID18998089-5"><a href="#cite_ref-PMID18998089_5-0">↑</a> P. Tammaro, K. Shimomura, P. Proks: Xenopus oocytes as a heterologous expression system for studying ion channels with the patch-clamp technique. In: Methods in molecular biology. Band 491, 2008, S. 127–139, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1007/978-1-59745-526-8_10">10.1007/978-1-59745-526-8_10</a>, <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18998089?dopt=Abstract">PMID 18998089</a>.

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<li id="cite_note-PMID25233993-6"><a href="#cite_ref-PMID25233993_6-0">↑</a> U. Sahin, K. Karikó, Özlem Türeci: mRNA-based therapeutics–developing a new class of drugs. In: Nature reviews. Drug discovery. Band 13, Nummer 10, Oktober 2014, S. 759–780, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1038/nrd4278">10.1038/nrd4278</a>, <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25233993?dopt=Abstract">PMID 25233993</a> (Review).

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<li id="cite_note-DignamMartin1983-7"><a href="#cite_ref-DignamMartin1983_7-0">↑</a> John D. Dignam, Paul L. Martin, Barkur S. Shastry, Robert G. Roeder: <cite style="font-style:italic">Eukaryotic gene transcription with purified components</cite>. In: <cite style="font-style:italic">Methods in Enzymology</cite>. Band 101, 1983, <a href="Internationale_Standardnummer_f%C3%BCr_fortlaufende_Sammelwerke" title="Internationale Standardnummer für fortlaufende Sammelwerke">ISSN</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="https://zdb-katalog.de/list.xhtml?t=iss%3D%220076-6879%22&key=cql">0076-6879</a>, S. 582–598, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1016/0076-6879%2883%2901039-3">10.1016/0076-6879(83)01039-3</a>.<span class="Z3988" title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rfr_id=info:sid/de.wikipedia.org:In-vitro-Transkription&rft.atitle=Eukaryotic+gene+transcription+with+purified+components&rft.au=John+D.+Dignam%2C+Paul+L.+Martin%2C+Barkur+S.+Shastry%2C+...&rft.date=1983&rft.doi=10.1016%2F0076-6879%2883%2901039-3&rft.genre=journal&rft.issn=0076-6879&rft.jtitle=Methods+in+Enzymology&rft.pages=582-598&rft.volume=101" style="display:none">

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<li id="cite_note-Roeder2005-8"><a href="#cite_ref-Roeder2005_8-0">↑</a> Robert G. Roeder: <cite style="font-style:italic">Transcriptional regulation and the role of diverse coactivators in animal cells</cite>. In: <cite style="font-style:italic">FEBS Letters</cite>. Band 579, Nr. 4, 2005, <a href="Internationale_Standardnummer_f%C3%BCr_fortlaufende_Sammelwerke" title="Internationale Standardnummer für fortlaufende Sammelwerke">ISSN</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="https://zdb-katalog.de/list.xhtml?t=iss%3D%220014-5793%22&key=cql">0014-5793</a>, S. 909–915, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1016/j.febslet.2004.12.007">10.1016/j.febslet.2004.12.007</a>.<span class="Z3988" title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rfr_id=info:sid/de.wikipedia.org:In-vitro-Transkription&rft.atitle=Transcriptional+regulation+and+the+role+of+diverse+coactivators+in+animal+cells&rft.au=Robert+G.+Roeder&rft.date=2005&rft.doi=10.1016%2Fj.febslet.2004.12.007&rft.genre=journal&rft.issn=0014-5793&rft.issue=4&rft.jtitle=FEBS+Letters&rft.pages=909-915&rft.volume=579" style="display:none">

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<li id="cite_note-DignamLebovitz1983-9"><a href="#cite_ref-DignamLebovitz1983_9-0">↑</a> J. D. Dignam, R. M. Lebovitz, R. G. Roeder: <cite style="font-style:italic">Accurate transcription initiation by RNA polymerase II in a soluble extract from isolated mammalian nuclei</cite>. In: <cite style="font-style:italic">Nucleic Acids Research</cite>. Band 11, Nr. 5, 1983, <a href="Internationale_Standardnummer_f%C3%BCr_fortlaufende_Sammelwerke" title="Internationale Standardnummer für fortlaufende Sammelwerke">ISSN</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="https://zdb-katalog.de/list.xhtml?t=iss%3D%220305-1048%22&key=cql">0305-1048</a>, S. 1475–1489, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1093/nar%2F11.5.1475">10.1093/nar/11.5.1475</a>.<span class="Z3988" title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rfr_id=info:sid/de.wikipedia.org:In-vitro-Transkription&rft.atitle=Accurate+transcription+initiation+by+RNA+polymerase+II+in+a+soluble+extract+from+isolated+mammalian+nuclei&rft.au=J.+D.+Dignam%2C+R.+M.+Lebovitz%2C+R.+G.+Roeder&rft.date=1983&rft.doi=10.1093%2Fnar%2F11.5.1475&rft.genre=journal&rft.issn=0305-1048&rft.issue=5&rft.jtitle=Nucleic+Acids+Research&rft.pages=1475-1489&rft.volume=11" style="display:none">

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<li id="cite_note-WangSawadogo1998-10"><a href="#cite_ref-WangSawadogo1998_10-0">↑</a> Jo C Wang, Michèle Sawadogo, Michael W Van Dyke: <cite style="font-style:italic">Plasmids for the in vitro analysis of RNA polymerase II-dependent transcription based on a G-free template</cite>. In: <cite style="font-style:italic">Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Gene Structure and Expression</cite>. Band 1397, Nr. 2, 1998, <a href="Internationale_Standardnummer_f%C3%BCr_fortlaufende_Sammelwerke" title="Internationale Standardnummer für fortlaufende Sammelwerke">ISSN</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="https://zdb-katalog.de/list.xhtml?t=iss%3D%220167-4781%22&key=cql">0167-4781</a>, S. 141–145, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1016/S0167-4781%2898%2900012-8">10.1016/S0167-4781(98)00012-8</a>.<span class="Z3988" title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rfr_id=info:sid/de.wikipedia.org:In-vitro-Transkription&rft.atitle=Plasmids+for+the+in+vitro+analysis+of+RNA+polymerase+II-dependent+transcription+based+on+a+G-free+template&rft.au=Jo+C+Wang%2C+Mich%C3%A8le+Sawadogo%2C+Michael+W+Van+Dyke&rft.date=1998&rft.doi=10.1016%2FS0167-4781%2898%2900012-8&rft.genre=journal&rft.issn=0167-4781&rft.issue=2&rft.jtitle=Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29+-+Gene+Structure+and+Expression&rft.pages=141-145&rft.volume=1397" style="display:none">

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